酶法制备GABA是一个不可逆反应，适宜的酸脱羧酶温度可以使GABA转化率达到最大，所以通过设置不同的枯草酶转化温度来探究温度对GABA转化率的影响。以100g/L的芽孢用谷氨酸为底物，溶于去离子水中，表达加入湿菌体(在55℃水浴锅预处理50min，谷氨杆菌改善细胞膜的酸脱羧酶通透性)30U/g，在150r/min的枯草水浴摇床中进行转化，反应过程中，芽孢用控制pH为5.0。表达温度梯度设置为25、谷氨杆菌30、酸脱羧酶35、枯草40、芽孢用45、表达50℃，反应24h后终止反应并进行煮沸处理，12000r/min离心5min得上清液，适当稀释并过0.22μm有机滤膜后用HPLC-OPA柱前衍生法进行检测，结果见图9。转化率随温度升高逐渐提高.当转化温度达到40℃时，GAD-0和GAD-PL转化率达到最高，分别为64.78％和82.27％，继续升高温度，转化率反而降低。这是因为枯草芽孢杆菌细胞壁厚，而反应温度过低时，底物与胞内酶液无法充分接触使得转化率低：当反应温度过高时，酶与PLP稳定性差，从而影响GABA的转化率。
以100g/L的谷氨酸为底物.溶于去离子水中，加入预处理过的湿菌体30U/g，在40℃、150r/min的水浴摇床巾进行转化，反应过程中，每隔2h用0.6mol/L的H2S04或NaOH调节pH，使其始终与初始pH保持一致。pH梯度设置为3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0，反应24h后终止反应并进行煮沸处理，12000r/min离心5min得上清液，适当稀释并过0.22μm有机滤膜后用HPLC-OPA柱前衍生法进行检测。结果见图10，当pH为4.5或5.0时，GABA转化率最高，GAD-0的GABA转化率为75.45％和76.21％，GAD-PL的GABA转化率为84.54％和84.21％。当DH小于4.5时，底物-水谷氨酸钠在酸性条件下容易酸水解生成谷氨酸析出，从而形成乳白色浑浊液体.不利于酶与底物的充分结合；当pH大于5.0时不利于酶活性巾心的赖氨酸残基以shifft-碱与PLP、底物结合，从而抑制GABA的生成。可见，酶转化法制备GABA的pH耐受范围窄，过酸或过碱都不利于酶促反应进行，考虑在高质量浓度底物下，过低的pH更容易导致底物析出，所以酶转化最适pH为5.0。
以100g/L的谷氨酸为底物，溶于去离子水中，加入预处理过的不同湿菌体(20、30、40、50、60U/g)，在40℃、150r/min的水浴摇床中反应24h，反应过程中，控制pH为5.0。反应结束后进行煮沸处理，12000r/min离心5min得上清液，适当稀释后用氨基酸柱前衍生法进行HPLC检测。结果见图11，重组菌全细胞转化率随着加菌量的增加而逐渐提高，其中GAD-PL和GAD-0分别在40U/g和50U/g时将底物完全转化，转化率达到100％。GAD-PL的加菌量少于GAD-0是因为前者细胞巾的PLP含量高于后者，PLP作为辅助因子有利于酶促反应的进行。
以100g/L的谷氨酸为底物，溶于去离子水中，加入预处理过的不同湿菌体，GAD-0和GAD-PL加入量分别为50U/g和40U/g，在40℃、150r/min的水浴摇床中反应24h，反应过程中，控制DH为5.0。反应结束后进行煮沸处理，12000r/min离心5min得上清液，适当稀释后用HPLC-OPA柱前衍生法进行检测，结果见图12。在0～20h，GAD-0和GAD-PL转化合成GABA的产量随时问延长迅速增加，在20h时转化率达到100％，之后随着反应进行，转化率不再发生变化。
以200g/L的谷氨酸为初始底物，溶于去离子水中，加入预处理过的不同湿菌体，GAD-0和GAD-PL力口菌量分另0为50U/g和40U/g，在40℃、150r/min的水浴摇床中反应6h后，每隔3h补加1.27g的谷氨酸同体至底物质量浓度分别为200、250、300、350、400g/L，反应过程中，控制pH为5.0，反应48h。反应结束后进行煮沸处理，12000r/min离心5min得上清液，适当稀释并过0.22μm有机滤膜后用HPLC-OPA柱前衍生法进行检测。结果见图13，当底物质量浓度达到400g/L谷氨酸时，GAD-0和GAD-PL转化生产GABA的转化率分别从100％(底物质量浓度350g/L谷氨酸)下降为97.72％和98.43％。综合考虑，为提高工业生产效率和节省下游分离纯化成本，选择350g/L作为酶法制备GABA的最适底物质量浓度。
作者成功构建并重组表达了含有Escherichiacoli来源的gadB基因的重组菌B.subtilis/pHY300PLK-gadB。实验表明在发酵过程中添加0.5mmol/L辅酶前体PL的GAD总酶活达到28.14U/mL，是对照总酶活的1.72倍。进一步优化重组菌全细胞酶法生产GABA的工艺条件，结果表明，当温度为40℃，pH为5.0，GAD-0和GAD-PL的最适加菌量分别为50U/g和40U/g时，GABA转化率达到100％。当谷氨酸质量浓度为400g/L时，GABA产量分别为275.60扎和273.61g/L。综上所述，作者考察了菌体发酵培养过程中添加辅酶前体PL对重组菌产GAD及制备GABA的影响，开发了一种不需要在发酵过程和酶转化体系巾添加昂贵辅酶PLP就能高效生产GABA的T艺技术，为GABA在食品和医药行业中的广泛应用打下了坚实基础。
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多元衍生 陪伴成长！玻璃货物行情：周期性下跌趋势或已形成？,行业资讯响应面法酶解藜麦蛋白制备α京东方再投465亿元在福建福清建立第6代AMOLED生产线,行业资讯玻璃是怎么进行着色处理的 平板玻璃的特点和作用是什么,行业资讯人间四月天 如诗如画 和七彩芽童装共赴美好家居玻璃贴膜的优点 钢化玻璃膜和磨砂膜有什么区别,行业资讯化工园区周边土壤、地下水自行监测相关问题及建议关注儿童健康：孕前饮食清淡食谱，为宝宝打造健康成长原创：关于标准GB18582激发消费活力 福建厦门召开商超合规指导会食品稳定剂在蔓越莓果汁中的应用研究（二）扫一扫，医疗器械经营企业监管信息全知道室内空气质量检测过程中存在问题及对策石英玻璃性能 石英玻璃的使用须知,行业资讯用烤漆玻璃做门头安全吗 门头装修用烤漆玻璃好还是铝塑板好,行业资讯玻璃背景墙的优点 艺术玻璃在生活中有哪些应用,行业资讯直播间涉及多项违法宣传 东阿阿胶被罚一种高钙营养蛋白质粉的开发及特性研究（二）这样的玻璃屋，你见过吗？,行业资讯耀皮玻璃30%股份被建材集团所带有,企业经营新设经营主体53.55万户 上海发布2023年优化营商环境白皮书Bonpoint春夏新品 倾情呈献滨海的清新北京市知识产权保护中心通州分中心试运行显成效冰箱覆膜板和钢化玻璃的区别 夹层玻璃该怎么选,行业资讯山东济南市场监管局开展“食安护佳节”行动怀孕试纸图片对比,如何辨别真假怀孕试纸jnby for mini 25 新品 时尚童真 搭载童年幻想玻璃行情走势分析，你竟不知道？,市场研究甲醇中胆固醇溶液标准物质：助力实验室精准分析与校准门窗用密封胶冬季施工注意事项,行业资讯三星显示器计划砸18亿美元 改L8药用植物通脱木的研究进展（三）镀膜玻璃分成了哪些类型 镀膜玻璃的生产制作方法,行业资讯书柜玻璃门用透明的好还是磨砂的好 厨房玻璃门怎么进行保养,行业资讯12月21日华东、华北、华中地区纯碱暂稳运行,行业资讯上海元旦期间受理投诉举报13060件 售后服务问题较集中海南出台《学校食堂委托经营管理规范》地方标准校园篮球场上必备的运动鞋 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